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將少數(shù)菌落轉移到纖維素濾膜上

（1） 在含有選擇性的瓊脂平板上放一張纖維素濾膜。

（2） 用無菌牙簽將各個菌落先轉移至濾膜上，再轉移至含有選擇性但未放濾膜的瓊脂主平板上。應按一定的格子進行劃線接種（或打點）。每菌落應分別劃線于兩個平板的相同位置上。后，在濾膜和主平板上同時劃一個含有非重組質粒的菌落。

（3） 倒置平板，于37℃培養(yǎng)至劃線的細菌菌落生長到0.5-1.0mm的寬度。

（4） 用已裝防水黑色繪圖墨水的針頭穿透濾膜直至瓊脂，在3個以上的不對稱位置作標記。在主平板大致相同的位置上也作上標記。

（5） 用Parafilm膜封好主平板，倒置貯放于4℃，直至獲得雜交反應的結果。

（6） 裂解細菌，按本段下面所述方法，使釋放的DNA結合于纖維素濾膜。

FISH是原位雜交技術大家族中的一員，因其所用探針被熒光物質標記（間接或直接）而得名，該方法在80年代末 被發(fā)明，現(xiàn)已從實驗室逐步進入臨床診斷領域?；驹硎菬晒鈽擞浀暮怂崽结樤谧冃院笈c已變性的靶核酸在退火 溫度下復性；通過熒光顯微鏡觀察熒光信號可在不改變被分析對象（即維持其原位）的前提下對靶核酸進行分析。DNA熒光標記探針是其中常用的一類核酸探針。利用此探針可對組織、細胞或染色體中的DNA進行染色體及基因水平 的分析。熒光標記探針不對環(huán)境構成污染，靈敏度能得到保障，植物原位雜交技術服務，可進行多色觀察分析，因而可同時使用多個探針，縮 短因單個探針分開使用導致的周期過程和技術障礙。

分子病理學在蛋白質和核酸等生物大分子水平上，應用分子生物學理論、技術及方法研究疾病發(fā)生L發(fā)展的過程，從而為傳統(tǒng)的病理學注入了生機。在如今的臨床病理診斷過程中，運用核酸原位雜交、PCR技術、免1疫熒光、免1疫組織化學染色等技術，能夠更加深化對疾病的本質認識，對于腫1瘤的診斷和治1療也有著臨床的指導意義。分子病理學診斷主要應用于以下幾個方面：1、對于腫1瘤易感基因的檢測，對于腫1瘤高危人群的篩檢具有實用價值，如檢測GSTπ基因以判定個體暴露于致癌物是的致癌危險性。2、腫1瘤相關病毒的檢測，如采用原位雜交方法檢測標本中HPV、EBER等病毒。

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